Expérience : Culture in vitro de pomme de terre | Technique actuelle simplifiée de culture de peau in vitro |
Prélever les germes de pomme de terre et les laver à l'eau du robinet Les plonger alors dans
le Domestos (ou autre solution désinfectante) pendant 15 minutes, puis dans les trois bains d’eau stériles
consécutifs, 5 minutes dans chaque bain.
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Prélever
un petit échantillon de peau et le plonger dans une substance
contenant des antibiotiques qui vont la protéger des bactéries.
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Découper
les germes en tronçons à l’aide d’un scalpel, dans les boites de Pétri.
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Découper la peau en petits morceaux en détachant délicatement le gras. Il n'est pas nécessaire à la mise en culture.
Une
enzyme va alors être introduite pour séparer le derme de l'épiderme.
Pour qu'elle agisse plus facilement et plus rapidement, on redécoupe la
peau en fines lamelles.
Incubation à 37°C pendant 3 heures avec cette enzyme qui va séparer le derme de l'épiderme.
On récupère ensuite l'épiderme.
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Installer
les tronçons dans les tubes de culture
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L'épiderme
est mis en présence d'une autre enzyme, la trypsine qui va casser les
liaisons qui unissent les cellules entre elles. Une fois dans un milieu
favorable, les cellules ainsi isolées pourront se multiplier.
On sépare les cellules de la trypsine et on compte alors celles-ci contenues dans un petit échantillon.
Cela va permettre de déterminer le nombre de cellules a ensemencer pour obtenir une croissance maximale.
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Placer
les tubes dans l’armoire de culture
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Elles sont mises en culture pendant une semaine dans une étuve.
Les cellules recouvrent alors toute la surface du flacon. On les remet
en présence de trypsine pour ensemencer à nouveau une cinquantaine de
flacons à leurs tours placés dans l'étuve.
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